大连化物所周雍进研究员团队（合成微生物学研究组1823组）与海军军医大学药学系张磊教授合作，在酚酸类天然产物合成生物学研究方面取得新进展。合作团队在酿酒酵母中构建与优化了酚酸生物合成途径，强化了关键辅因子的供给和周转，实现了酚酸化合物的高效合成。相关研究成果以“Engineering Cofactor Supply and Recycling to Drive Phenolic Acid Biosynthesis in Yeast”为题，于近日发表在《自然-化学生物学》（Nature Chemical Biology）上。

　　近年来，合成生物学快速发展使得天然产物可持续供应走向现实，在微生物细胞中构建完整生物合成途径，可实现系列复杂天然产物如青蒿酸、生物碱等的高效生物合成。酿酒酵母被广泛应用于食品酿造，且其具有极强的可塑性、鲁棒性和可靠的安全性，逐渐成为构建细胞工厂的主要平台之一。目前，虽然酶工程和途径工程已广泛应用于提高酵母细胞工厂的性能，但其用于合成天然产物的效率有待进一步提高。

在上述背景下，合作团队致力于提升酚酸类天然产物合成效率。研究发现，细胞内辅因子参与的相关催化酶活性除了由酶表达量决定，还和辅因子水平有关，特别是表达外源酶时往往会面临辅因子不匹配或者供应不足的限制。由此，周雍进团队前期系统综述了辅因子在天然产物合成中的重要价值，并提供了四种可行的辅因子工程方案：重建辅因子的生物合成，提升胞内/细胞器内辅因子的代谢水平，平衡辅因子的稳态，以及提高辅因子的活性形式（iScience，2020）。

酵母中酚酸化合物之一咖啡酸生物合成需要辅因子FAD(H₂)和NADPH，而阿魏酸的生物合成需要SAM作为甲基供体。本工作中，团队通过改造中心代谢以提高NADPH供应、构建胞浆FAD(H₂)合成途径，以及将线粒体FAD(H₂)导到胞浆以提高胞浆FAD(H₂)供应等方式，显著提高了咖啡酸生物合成效率，使其产量达到5.5g/L，远高于文献中已报道的0.8g/L。在此基础上，团队利用高表达甲基转移酶，构建了阿魏酸生物合成途径，进一步强化了甲基循环以解除甲基转移酶抑制效应，提高了甲基供体辅因子SAM水平和SAM周转，使得阿魏酸产量达到3.8g/L，远高于文献中已报道的0.04g/L。

该工作揭示了酵母中不同辅因子调控规律，特别是细胞内不同细胞器之间的辅因子分配规律，为辅因子调控提供了理论指导。并且，该工作将为复杂活性天然产物（木脂素和多聚酚酸等）的高效合成提供充足前体，有望为天然产物新资源开发和濒危中药资源的可持续利用提供保障。

        研究者利用能源生物技术平台的DasGip平行生物反应系统（Eppendorf）对工程菌株进行发酵，获得高产量咖啡酸及阿维酸。该设备在保证数据可靠性的同时，可大幅提升工作质量及工作效率。